Наша реклама

Поиск

Рекомендуемые методики

Posted 6/14/2009 в 6:44:43 ДП

Методика мембранной фильтрации
Асептически переносят подходящее количество твердого испытуемого материала (0,3—б г в зависимости от размера упаковки) в стерильную колбу, содержащую около 200 мл пептона (1 г/л) ИР1, закрывают колбу и вращают для быстрого растворения. Если испытуемый материал растворяется медленно или полученный раствор быстро не фильтруется, объем растворителя можно увеличить, но он «е должен превышать 400 мл. Тотчас после растворения материала асептически фильтруют раствор при пониженном давлении через мембранный фильтр, смоченный стерильной водой или пептоном (1 г/л) ИР1. Для ускорения процесса фильтрования раствор можно фильтровать, используя одновременно две фильтровальные установки. Для удаления остаточного количества антибиотика из мембраны ее промывают достаточным количеством пептона (1 г/л) ИР1, к которому, если имеется указание в частной статье (для антибиотиков ряда пенициллина и цефалоспорина), прибавлено достаточное количество пенициллин азы ИР.
После завершения фильтрования мембрану асептически делят на две приблизительно равные части. Переносят одну часть мембраны в сосуд (для этого пригодна пробирка), содержащий 50—100 мл культуральной среды Кс4 (меркапто-уксусная среда), другую часть мембраны помещают в другой
сосуд, содержащий 50—100 мл культуральной среды Кс5 (гидролизат соевой муки и казеина).
Через определенные промежутки времени следует проводить контрольные испытания, чтобы показать, что остаточная антибиотическая активность снижена с помощью описанной выше методики промывания ниже уровня, при котором происходит рост посевного материала, содержащего 50—100 микроорганизмов, чувствительных к испытуемому антибиотику.
Методика прямого испытания
В зависимости от размера упаковки берут от 1 до 10 порций, каждая по 0,3 г испытуемого материала, и асептически переносят их в отдельные стерильные сосуды (для этого пригодны пробирки), содержащие 50—100 мл культуральной среды Кеб (меркаптоуксусная среда с пенициллиназой). Помещают порции такого же размера в другой набор отдельных стерильных сосудов, содержащих 50—100 мл культуральной среды Кс7 (гидролизат соевой муки и казеина с пенициллиназой).
Проверяют способность пенициллиназы, содержащейся в среде, инактивировать весь пенициллин в испытуемом материале; для этого добавляют в один сосуд, содержащий куль-туральную среду Кеб, количество материала, взятое из одной испытуемой упаковки. Затем прибавляют 1,0 мл разведения, содержащего 50—100 микроорганизмов подходящего штамма (пригоден штамм АТСС 6538-Р Staphylococcus aureus) в культуральной среде Кс4. Через 24 ч после инкубации при 30—32 °С должен наблюдаться типичный рост микроорганизмов.
Инкубирование
Инкубируют в течение 7 сут сосуды, содержащие жидкую меркаптоуксусную среду (культуральные среды Кс4 и Кеб), при 30—32 °С и сосуды, содержащие гидролизат соевой муки и казеина (среды Кс5 и Кс7) при 22—25 °С. При прямом испытании слегка встряхивают сосуды не менее одного раза в день или до полного растворения.
Если используют другие культуральные среды, то температура и длительность инкубации должны быть соответственно изменены.
Осматривают сосуды с инокулированной средой через регулярные промежутки времени и в последний день инкубации, чтобы выявить микробный рост. Если такой рост наблюдается, его следует подтвердить исследованием среды под микроскопом. Желательно, чтобы аппарат для инкубации был снабжен регистрирующим температуру устройством.
Интерпретация результатов испытания
Если ни в одном из сосудов не отмечен рост микроорганизмов (за исключением контрольного сосуда с положительным ростом), материал отвечает требованиям испытания. Если, однако, рост отмечен, испытание следует повторить. Если при этом ни в одном из сосудов не отмечен рост микроорганизмов (за исключением контрольного сосуда с положительным ростом), материал отвечает требованиям испытания. Если в повторном испытании отмечен рост, материал не выдерживает испытания на стерильность.
Для того чтобы установить, связана ли неудача испытания с самим материалом или с возможными недостатками методики испытания, требуется компетентное заключение эксперта.