Наша реклама

Поиск

Зонный электрофорез (электрофорез с использованием среды носителя)

Posted 6/14/2009 в 5:25:43 ДП

При этом методе используют образцы только небольших размеров. Природа среды носителя (например, бумага, ацетат целлюлозы, гель крахмала, агаровый гелъ, полиметакрил-амид, смешанный гель) обусловливает дополнительные факторы, влияющие на подвижность. Скорость перемещения зависит от подвижности частиц, а также от электро-эндосмо-тического тока (в случае носителей с полярными свойствами), от токов, обусловленных испарением (вызванным теплом, генерируемым за счет эффекта Джоуля), и от градиента электрического поля. На практике подвижностью электрофоретических зон и их знаками пренебрегают; зоны обнаруживают эмпирически или путем сравнения с поведением стандартного образца в тех же условиях. После разделения составных частей положение бесцветных веществ может быть определено путем обработки элек-трофореграмм реактивом, который переводит их в окрашенные или флуоресцирующие производные. Для количественных целей пятно (зона) может быть тщательно выделено, вещество злюировано подходящим растворителем и затем определено непосредственно или после химической реакции достаточно чувствительным методом, таким, как спектрофотометрическое измерение. По другой количественной методике после превращения вещества в окрашенное производное интенсивность зоны можно измерить при помощи сканирующего денситометра. Ниже перечислены составные части прибора для электрофореза на среде-носителе. Источник постоянного тока, предпочтительно со стабилизированным напряжением. Камера для электрофореза, обычно в форме параллелепипеда, выполненная из стекла или прочного пластического материала, с плотной воздухонепроницаемой крышкой, обеспечивающей поддержание атмосферы насыщенной влажности. В противоположные стенки камеры запаяны два изолированных проводника, на конце каждого из них имеется внутренний соединитель, к которому присоединены электроды из платиновой проволоки. В целях безопасности камера должна быть снабжена приспособлением, обеспечивающим прерывание электропитания при снятии крышки. В камере у двух противоположных сторон вставлены две двойные кюветы, разделенные вдоль на две равные половины. В другом варианте эти кюветы могут быть частью, самой камеры. Вдоль основания каждого из внешних отделений кювет проложен один платиновый электрод. Электроды соединены через наружный изолированный кабель с источником постоянного тока напряжением не менее 450 В при 150 мА. Источник энергии должен быть оборудован прибором, контролирующим и указывающим напряжение, а также потребление тока. Для стабилизации напряжения может быть встроена дополнительная цепь. Держатель. Если используют бумагу или ацетат целлюлозы, полоски носителя, пропитанные проводящей жидкостью, укрепляют с помощью соответствующего приспособления в определенном положении, а их концы погружают в кюветы с электродами. При электрофорезе на геле ровный слой геля помещают клеющей стороной «а стекло и к-каждому концу слоя присоединяют электрические клеммы. Приспособление для обнаружения и измерения пятен.