Наша реклама

Поиск

Прибор

Posted 6/14/2009 в 3:57:52 ДП

Измерение интенсивности флуоресценции можно провести с помощью простого флуорометра с фильтрами (иногда прибор называют флуориметром). Такой прибор состоит из источника излучения, первичного фильтра, камеры для вещества вторичного фильтра и системы обнаружения флуоресценции. В большинстве таких флуорометров детектор располагается под углом 90р к падающему лучу, что позволяет падающему излучению проходить через испытуемый раствор без загрязнения выходного сигнала, получаемого детектором флуоресценции. Однако на детектор неизбежно попадает некоторое количество падающего излучения в результате внутреннего рассеивания — свойства, присущего самим растворам; таким же образом влияет присутствие пыли или других твердых веществ. Для удаления этого остаточного рассеивания используют фильтры. Первичный фильтр отбирает коротковолновое излучение, способное вызывать возбуждение испытуемого вещества, в то время как вторичный фильтр, обычно строго отсекающего типа, пропускает флуоресценцию при большей длине волны, но блокирует рассеянное возбуждающее излучение.
В большинстве флуорометров в качестве детекторов используются фотоумножители; существует много типов фотоумножителей со специальными характеристиками в отношении спектральной области максимальной чувствительности, электрического шума и усиления. После усиления фотоэлектронного тока его значение либо отсчитывается визуально на измерительном приспособлении, либо регистрируется.
Флуоресцентный спектрофотометр отличается от флуорометра с фильтрами тем, что фильтры в нем заменены моно-хроматорами прнзменного или решетчатого типа. Для аналитических целей флуоресцентный спектрофотометр имеет преимущества перед фильтрующим флуорометром в отношении избирательности длины волны, возможности быстрого приспособления к условиям опыта и удобства пользования.
Во флуорометрах и флуоресцентных спектрофотометрах используются различные источники излучения. Ртутные лампы относительно стабильны и излучают энергию в основном при дискретных длинах волн. Вольфрамовые лампы обеепе-ивают достаточно равномерное излучение по всей видимой области спектра. В флуоресцентных спектрофотометрах часто используется ксеноновая дуговая лампа высокого давления, поскольку она достаточно равномерно излучает энергию от ультрафиолетовой до инфракрасной области спектра.
Во флуоресцентных спектрофотометрах монохроматоры имеют щель. Узкая щель обеспечивает высокое разрешение и спектральную чистоту, большая щель — высокую интенсивность. Выбор ширины щели определяется разницей в длине волны возбуждающего и испускаемого излучения, а также требуемой степенью чувствительности.
Кюветы, используемые при измерении флуоресценции, могут быть прямоугольными, аналогичными кюветам, применяемым в абсорбционных спектрофотометрах; их отличие состоит в том, что все 4 вертикальные стенки и основание должны быть отполированы; можно применять также кюветы в виде пробирок с плоским отполированным основанием. Удобный размер кювет 2—3 мл, но некоторые приборы могут быть снабжены небольшими кюветами емкостью 0,1—0,3 мл или капиллярной кюветой, требующей еще меньше раствора.